2020-05-13
一、樣品前處理
1、所用試劑
1、1 濃鹽酸，優(yōu)級(jí)純
1、2 6mol/L 鹽酸：濃鹽酸與水1:1混合
1、3 水：去離子水
1、4 苯酚：須重蒸
1、5 19種氨基酸標(biāo)準(zhǔn)品
2、標(biāo)樣配置
氨基酸混合標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液：含有天冬氨酸、蘇氨酸等17種常見(jiàn)組成蛋白質(zhì)的氨基酸。
?；撬針?biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液：用PH2.2的檸檬酸緩沖液配置成2.5umol/L的儲(chǔ)備液備用。
正亮氨酸標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液：用PH2.2的檸檬酸緩沖液配置成2.5umol/L的儲(chǔ)備液備用。
璜基丙氨酸標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液：用PH2.2的檸檬酸緩沖液配置成2.5umol/L的儲(chǔ)備液備用。
蛋氨酸砜標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液：用PH2.2的檸檬酸緩沖液配置成2.5umol/L的儲(chǔ)備液備用。
羥脯氨酸標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液：用PH2.2的檸檬酸緩沖液配置成2.5umol/L的儲(chǔ)備液備用。
鳥(niǎo)氨酸標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液：用PH2.2的檸檬酸緩沖液配置成2.5umol/L的儲(chǔ)備液備用。
將17種氨基酸混合標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液、?；撬帷⒄涟彼?、璜基丙氨酸、蛋氨酸砜、羥脯氨酸、鳥(niǎo)氨酸及PH2.2的檸檬酸緩沖液按照1:1:1:1:1:1:1:3配置成0.25umol/L的標(biāo)準(zhǔn)品待用。
3、前處理設(shè)備
1) 天平
2) 水解管
3) 量筒
4) 無(wú)油真空泵
5) 干浴水解、濃縮儀
6) 移液管
7) 0.45um濾膜
4、樣品制備（參考?xì)W盟飼料指令98/64/EC ）
1、樣品的準(zhǔn)備
粉碎樣品，通過(guò)0.5mm的篩孔。高水分的樣品粉碎前必須低于50℃鼓風(fēng)干燥或者冷凍干燥。高脂肪含量的樣品粉碎前必須用輕質(zhì)石油（3.12）脫脂。
2、氧化
從準(zhǔn)備好的樣品中稱(chēng)取約0.1~1克樣品，準(zhǔn)確到0.2mg，于100 ml帶螺紋蓋子的瓶子中，稱(chēng)取的樣品應(yīng)該含有大約10mg氮，水分不能超過(guò)100mg。將瓶子放于冰水浴中冷卻至0℃，加5ml氧化試劑（過(guò)甲酸苯酚），用帶彎頭的玻璃刮勺混合。用空氣密封膜將瓶子和刮勺一起密封，密封后一起放入0℃冰箱的冰水浴中，放置16小時(shí)。之后，從冰箱中取出，加0.84克偏重亞硫酸鈉（3.4）來(lái)分解過(guò)量的氧化試劑。
3、水解
加入25毫升鹽酸-苯酚溶液, 然后將反應(yīng)瓶放在烘箱中，溫度控制在110攝氏度，旋松帽子（防止玻璃瓶子破裂），水解1小時(shí)。然后快速旋緊瓶塞（戴手套和護(hù)眼罩）將其繼續(xù)在烘箱110攝氏度下水解23小時(shí)。
4、加入內(nèi)標(biāo)并且調(diào)節(jié)pH值到2.20
當(dāng)水解反應(yīng)結(jié)束后，將反應(yīng)瓶從烘箱中取出，并且打開(kāi)瓶口（戴手套和護(hù)目鏡）。冷卻后用定量加樣器準(zhǔn)確加入15.00克(15毫升)正亮氨酸標(biāo)準(zhǔn)溶液，混合并且轉(zhuǎn)移水解溶液到250毫升的塑料燒杯中。加入大約125毫升檸檬酸緩沖液和19毫升氫氧化鈉水溶液,將實(shí)驗(yàn)燒杯放入到樣品容器中用氫氧化鈉水溶液將溶液調(diào)節(jié)到pH為正好2.20。轉(zhuǎn)移一部分溶液（不需要全部）到50毫升有蓋子的塑料瓶中。可以馬上測(cè)定或者放入冰箱等到分析的時(shí)候測(cè)定。
二、分析方法描述（Biochrom 30+）
氨基酸分析儀分析方法參數(shù)：
1) 色譜柱：Biochrom Na型陽(yáng)離子交換樹(shù)脂柱，4.6X20cm
2) 分離程序：
3) 運(yùn)行時(shí)間：分析時(shí)間65min
4) 反應(yīng)單元溫度：135°C。
5) 檢測(cè)波長(zhǎng)：570nm、440nm同時(shí)檢測(cè)。
附、魚(yú)料分析圖譜及做樣結(jié)果
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