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Biochrom30+氨基酸分析儀檢測石斑魚中水解氨基酸

2019-09-16

Biochrom30+氨基酸分析儀檢測石斑魚中水解氨基酸

 

 

 

 

 

摘要:

以石斑魚為原料,使用Biochrom30+全自動氨基酸自動分析儀對其肌肉的氨基酸組成進行分析。結果表明石斑魚肌肉中氨基酸總量的質量百分比為17753.114mg/100g,必需氨基酸(不含色氨酸)占氨基酸總量的40.63%,鮮味氨基酸占氨基酸總量的38.52%。

 

 

 

 

 

  • 樣品前處理
  1. 所用試劑
    1. 濃鹽酸,濃度≥36%,優(yōu)級純
    2. 6mol/L 鹽酸:取500mL 鹽酸加水稀釋至1000mL,混勻。
    3. 水:去離子水
    4. 苯酚:須重蒸
    5. 17種氨基酸標準品
  •  
  •  
  •  
  •  

1

Asp       

  •  

2

Thr

  •  

3

Ser       

  •  

4

Glu

  •  

5

Pro       

  •  

6

Gly

  •  

7

Ala       

  •  

8

Cys

  •  

9

Val       

  •  

10

Met

  •  

11

Ile        

  •  

12

Leu

  •  

13

Tyr

  •  

14

Phe       

  •  

15

His

  •  

16

Lys

  •  

17

Arg

  •  

 

 

 

 

  1. 前處理設備
  1. 分析天平:感量分別為 0.0001g和0.00001g。
  2. 水解管:耐壓螺蓋玻璃試管,體積為25mL
  3. 勻漿機。
  4. 無油真空泵
  5. 干浴水解濃縮儀
  6. 移液管
  7. 0.22um濾膜

 

  1. 樣品制備(參考國標GB 5009.124-2016

原料魚手工去除魚鱗、魚皮、魚刺和內臟,采肉后清洗、瀝干,在勻漿機中打成肉糜,于-18℃冰箱中冷凍保存,分析時取出解凍后使用。

 

  1. 試樣水解

稱取含蛋白7.5-25mg的試樣,加入水解管中,加入15mL 6mol/L鹽酸,繼續(xù)向水解管內加入苯酚3滴~4滴。冷凍3min~5min,接到真空泵的抽氣管上,抽真空(接近0Pa),然后充入氮氣,重復抽真空-充入氮氣3次后,在充氮氣狀態(tài)下擰緊螺蓋。 將水解管放入干浴水解濃縮儀中,110°C水解22-24h,冷卻、混勻、開管、轉移并定容到50ml容量瓶中,用移液管取適量樣液,在干浴水解濃縮儀中50°C吹干,必要時加入少許水,重復吹干1-2次,加入3-5mL PH2.2的稀釋上機用檸檬酸鈉緩沖液溶解,振蕩混勻后,吸取溶液通過0.22μm 濾膜后,轉移至儀器進樣瓶,為樣品測定液,供儀器測定用

 

  • 分析方法描述(Biochrom 30+
  •  
  1. 色譜柱:Biochrom Na型陽離子交換樹脂柱,4.6´20cm
  2. 分離程序:

NO.

Time

Temp

Buffer

Pump

Nin

Rec

Commands

1

01:00

48

1

35.0ml/h

ON

OFF

 

2

00:00

48

1

35.0ml/h

ON

OFF

Reset

3

01:00

48

1

35.0ml/h

ON

OFF

Load

4

06:40

48

1

35.0ml/h

ON

ON

 

5

13:00

52

2

35.0ml/h

ON

ON

 

6

01:00

52

5

35.0ml/h

ON

ON

 

7

16:00

95

5

35.0ml/h

ON

ON

 

8

04:00

95

6

35.0ml/h

ON

ON

 

9

04:00

95

1

35.0ml/h

ON

ON

 

10

09:00

48

1

43.0ml/h

OFF

OFF

 

11

02:00

48

1

35.0ml/h

ON

OFF

 

End

 

 

 

 

 

 

 

 

  1. 運行時間:經分析時間+再生時間 57min
  2. 反應單元溫度:135°C。
  3. 檢測波長:570nm、440nm同時檢測。

 

 

  • 樣品中氨基酸含量的計算

   樣品測定液氨基酸的含量按式(2)計算:

ci = cs /As ×Ai                 ……………………(2)

式中:

ci ———樣品測定液氨基酸i的含量,單位為納摩爾每毫升(nmol/mL);

Ai ———試樣測定液氨基酸i的峰面積;

As ———氨基酸標準工作液氨基酸s的峰面積;

cs ———氨基酸標準工作液氨基酸s的含量,單位為納摩爾每毫升(nmol/mL)。

 

試樣中各氨基酸的含量按式(3)計算:

Xi = (ci ×F ×V ×M)/ (m ×109) ×100 ……………………(3)

式中:

Xi ———試樣中氨基酸i的含量,單位為克每百克(g/100g);

ci ———試樣測定液中氨基酸i的含量,單位為納摩爾每毫升(nmol/mL);

F ———稀釋倍數;

V ———試樣水解液轉移定容的體積,單位為毫升(mL);

M ———氨基酸i的摩爾質量,單位為克每摩爾(g/mol);

m ———稱樣量,單位為克(g);

109 ———將試樣含量由納克(ng)折算成克(g)的系數;

100 ———換算系數。

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

附、石斑魚分析圖譜及做樣結果

 

 

 

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